一、转化效率
1~5×1010 cfu/μg DNA。
二、基因型
[F´ traD36 proAB lacIqZΔM15]supE thi-1Δ(lac-proAB)Δ(mcrB-hsdSM)5(rK–mK–)
三、产品说明
TG1来源于E. coli K-12菌株,是主要的噬菌体展示用菌株,同时也可用于普通质粒的构建,lacIqZΔM15的存在使其可以用于蓝白斑筛选等实验;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时推荐使用质粒提取试剂盒中去蛋白液以去除菌体内大量的核酸酶。仁域生物的电击感受态细胞是收集生长在对数期的TG1菌,经特殊工艺制作而成,可以直接用于电击转化实验。
四、使用方法
(1)打开电击仪,电击条件设置为2.5Kv,预设程序Ec-2((此为BioRad 电转仪推荐参数),取TG1电击感受态1支(200ul/支),每支感受态中加入4ul脱盐后的连接产物,轻柔混匀,冰上静置20min;
(2)电击:电击杯中加入200ul TG1感受态和连接产物混合物;
(3)电击后立即加入1ml 2YT至电击杯中,轻轻吹打,将清洗下来的电击产物吸入10ml 2YT中;
(3)复苏:将三角瓶放入摇床,37℃,100rpm,60分钟;
(4)测库容:复苏结束之后,分别取100ul和10ul复苏产物各一管,补齐至1ml,各取100ul涂布2YT(0.1%Amp,1%Glurose)平板,37℃倒置过夜培养;
(5)涂布大平板:放置37℃温箱倒置过夜。
五、注意事项
1. 加入的DNA时体积不应大于感受态体积的1/20;
2. 连接产物或质粒必须脱盐处理,否则转化率会显著降低;
3. 电击前后应低温处理,高温会损伤细胞,降低转化效率;
4. 电击感受态细胞最好保存在-80℃以下,且保存不应超过6个月。